我们提供CRISPR/Cas9基因敲除表达载体构建和验证服务。我们可以根据您感兴趣的基因设计Cas9基因敲除靶点，构建CRISPR/Cas9基因敲除表达载体和验证载体，并且在细胞内验证基因敲除效率，验证的原理与细胞内实现基因敲除的原理一致，从而限度反应基因敲除质粒在活体内的活性。
我公司构建的pCas9/gRNA1载体可在哺乳动物细胞内同时表达人源化Cas9蛋白和gRNA，只需转染一个质粒就能实现对靶基因的切割。
Cas9蛋白的编码序列用人的密码子表达偏好进行优化，已验证可以在人、大鼠和小鼠细胞中高效表达。gRNA通过U6启动子启动表达。U6启动子属于III类RNA启动子，有精确的转录起始位点和终止位点，可以准确的转录出gRNA，并且在各种动物细胞中都表达良好。
CRISPR/Cas9载体构建服务
| 编号 | 名称 | 服务内容 | 提交报告 | 提交产品 | 周期 | 价格 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| C1001 | CRISPR/Cas9载体构建服务 | 根据靶基因序列设计基因敲除靶点，设计并构建3个pCas9/gRNA1基因敲除载体。 | 已构建载体测序报告 | 1、3个靶基因基因敲除载体。 2、1个阴性对照载体。 | 2周 | 3600元 |
| C1002 | CRISPR/Cas9载体验证服务 | 1、根据靶基因序列设计基因敲除靶点，设计并构建3个pCas9/gRNA1基因敲除载体。 2、设计并构建基因敲除效率验证载体。 3、在293T细胞验证基因敲除效率。 | 1、已构建pCas9/gRNA1载体测序结果。 2、基因敲除效率证载体测序结果。 3、基因敲除效率验证实验报告。 | 1、3个靶基因基因敲除载体。 2、已构建的基因敲除效率验证载体。 3、阴性对照载体和阳性对照载体各1个。 | 3周 | 6800元 |
| C1003 | CRISPR/Cas9载体服务套餐 | 1、根据靶基因序列设计基因敲除靶点，设计并构建3个pCas9/gRNA1基因敲除载体。 2、设计并构建基因敲除效率验证载体和特异性验证载体。 3、在293T细胞验证基因敲除效率和基因敲除特异性。 | 1、已构建pCas9/gRNA1载体测序结果。 2、基因敲除效率证载体和特异性验证载体测序结果。 3、基因敲除效率检测实验报告。 4、基因敲除效率特异性检测实验报告。 | 1、3个靶基因基因敲除载体。 2、已构建的基因敲除效率验证载体。 3、已构建的基因敲除特异性验证载体。 4、阴性对照载体和阳性对照载体各1个。 | 3周 | 8800元 |
Cas9/gRNA基因敲除实例
基因敲除验证质粒pTYNE上有突变的GFP基因。pTYNE转染后表达出有移码突变的GFP，因此不产生荧光。根据pTYNE序列设计构建的Cas9/gRNA质粒表达Cas9蛋白和有pTYNE靶点的小RNA。pCas9/gRNA与pTYNE共转染293V细胞，48小时后产生荧光，显示pCas9/gRNA对pTYNE进行了成功的切割和修复。
图1：实验原理
图2：转染后荧光照片
